连翘
1. 实验分析
1.1 实验仪器及耗材
■ 色谱柱:InertSustain C18 5µm 250 × 4.6mm (P/N:5020-07346)
■ GL Filter针式过滤器(GL0604 25mm x 0.22μm Nylon)
■ GL Vial样品瓶(GL0008 2mL透明瓶 带刻度+GL0143 红膜白胶垫片)
■ MPA-200 电动移液枪(1065-43503)
1.2 新旧药典对比
检测项目:连翘苷-含量测定
药典对比:修订了溶液的配置方法
【
溶液配制】
2015版:
对照品溶液的制备:取连翘苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1mL含0.2mg 的溶液,即得。
供试品溶液的制备:取本品粉末(过五号筛)约1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加人甲醇15ml,称定重量,浸渍过夜,超声处理(功率250W,频率40kHz)25分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液5ml,蒸至近干,加中性氧化铝1% 拌勻,加在中性氧化铝柱(100-120目,1g,内径为1-1.5cm)上,用70%乙醇80ml冼脱,收集洗脱液,浓缩至干,残渣用50%甲醇溶解,转移至5ml量瓶中,并稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul,注入液相色谱仪,测定,即得。
本品按干燥品计算,含连翘苷(C27H34O11)不得少于0. 15%。
2020版:
对照品溶液:取连翘苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每 1ml 含 0.2mg 的溶液,即得。
供试品溶液:取本品粉末(过五号筛)约 2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇 25ml,称定重量,超声处理(功率250W,频率 40kHz)25 分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液 10ml,置 25ml 量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul,注人液相色谱仪,测定,即得。
本品按干燥品计算,含连翘苷(C27H34O11)不得少于0. 15%。
【
系统适用性要求】理论板数按连翘苷峰计算应不低于 3000。
1.3 色谱条件
色谱柱:InertSustain C18 5µm 250 × 4.6mm(P/N:5020-07346)
流动相:乙腈-水(25:75)
流速:1ml/min
柱温:25℃
检测波长:277nm
进样量:10µl
仪器型号:Thermo Ultimate 3000
检测器:DAD
2. 实验结果与讨论
对照品图谱:
序号 |
名称 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
1 |
连翘苷 |
14.220 |
15.399 |
45.760 |
11278 |
1.01 |
供试品图谱:
序号 |
名称 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
分离度 |
1 |
|
13.510 |
2.022 |
7.419 |
15451 |
0.97 |
1.65 |
2 |
连翘苷 |
14.290 |
9.734 |
30.430 |
12531 |
1.04 |
|
【
重现性结果】
进样针数 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
分离度 |
1 |
14.290 |
9.734 |
30.430 |
12531 |
1.04 |
1.65 |
2 |
14.323 |
9.602 |
30.031 |
12551 |
1.04 |
1.64 |
3 |
14.353 |
9.525 |
29.877 |
12713 |
1.03 |
1.68 |
4 |
14.360 |
9.547 |
29.926 |
12696 |
1.03 |
1.68 |
5 |
14.360 |
9.523 |
29.637 |
12525 |
1.03 |
1.67 |
3.
结论
连翘苷按照新2020版含量检测方法检测,供试品理论塔板数达12531,且5次重复实验理论塔板数及保留时间没有下降,故Inertsustain C18适合用于2020版药典连翘检测项下连翘苷的含量分析。