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新的应用

2020年药典一部新增应用案例-黄芩

发布时间:2020-04-26 12:00 发布人:admin
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黄芩
1. 实验分析
1.1 实验仪器及耗材
■ 色谱柱:InertSustain C18 5µm 250 × 4.6mm (P/N:5020-07346)
■ GL Filter针式过滤器(GL0604 25mm x 0.22μm Nylon)
■ GL Vial样品瓶(GL0008 2mL透明瓶 带刻度+GL0143 红膜白胶垫片)
■ MPA-200 电动移液枪(1065-43503)

1.2 新旧药典对比
检测项目:含量测定
药典对比:修订,原15版药典仅需检测黄芩苷,20版药典更新检测黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素四种物质。
2015版药典测定黄芩苷
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水-磷酸(47:53:0.2)为流动相;检测波长为280nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500。
对照品溶液的制备:取在60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含60μg的溶液,即得。
供试品溶液的制备:取本品中粉约0.3g,精密称定,加70%乙醇40ml,加热回流3小时,放冷,滤过,滤液置100ml量瓶中,用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣,洗液滤入同一量瓶中,加70%乙醇至刻度,摇匀。精密量取1ml,置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
现2020版药典测定黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素
溶液配制
对照品溶液的制备:取黄芩苷对照品、汉黄芩苷对照品、黄芩素对照品、汉黄芩素对照品适量,精密称定,加 70%甲醇制成每 1ml 含黄芩苷 300 µg、汉黄芩苷 80 µg、黄芩素 50 µg、汉黄芩素 20 µg 的混合溶液,即得。 
供试品溶液的制备:取本品粉末(过四号筛)约 0.1 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入 70%甲醇 50 ml,密塞,称定重量,超声处理(功率 400W,频率 100kHz)15 分钟,放冷,再称定重量,用 70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 µl,注入液相色谱仪,测定,即得。
 
1.3 色谱条件
色谱柱:InertSustain C18 5µm 250 × 4.6mm (P/N:5020-07346)
流动相:以乙腈为流动相A,0.1%磷酸为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱
时间(min) 流动相A(%) 流动相B(%)
0~10 22→25 78→75
10~15 25 75
15~25 25→32 75→68
25~30 32→40 68→60
30~35 40 60
35~40 40→50 60→50
40~45 50→95 50→5
45~50 95 5
流速:1 ml/min
柱温:25℃
检测波长:276 nm
进样量:5 µl
柱压:107 bar
仪器型号:Thermo Ultimate 3000
检测器:DAD

2. 实验结果与讨论
对照品图谱:

序号 名称 t/min 峰面积 峰高 理论塔板数 拖尾因子
1 黄芩苷 16.510 92.557 318.382  20612 1.03
2 汉黄芩苷 27.083 38.585 172.193 91904 1.01
3 黄芩素 34.263 29.918 162.784 220530 1.02
4 汉黄芩素 43.690 14.778 110.101 667023 0.99
 
 
供试品图谱:

序号 名称 t/min 峰面积 峰高 理论塔板数 拖尾因子 分离度
2 黄芩苷 16.533 144.008 198.004 20680 1.06 2.17
3 汉黄芩苷 27.083 32.312 142.914 93131 1.06 /
5 黄芩素 34.260 24.048 130.082 223482 1.03 2.86
6 汉黄芩素 43.687 8.300 62.434 1098378 0.97 2.74
 
重现性:

 



3. 结论
黄芩按照新2020版含量检测方法检测,供试品黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素理论塔板数分别为20680、93131、223482、1098378,且5次重复实验理论塔板数及保留时间没有下降,故Inertsustain C18适合用于2020版药典黄芩检测项下黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的含量分析。

说明 :本次实验按照公示稿要求进行,无改动。
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