黄芩
1. 实验分析
1.1 实验仪器及耗材
■ 色谱柱:InertSustain C18 5µm 250 × 4.6mm (P/N:5020-07346)
■ GL Filter针式过滤器(GL0604 25mm x 0.22μm Nylon)
■ GL Vial样品瓶(GL0008 2mL透明瓶 带刻度+GL0143 红膜白胶垫片)
■ MPA-200 电动移液枪(1065-43503)
1.2 新旧药典对比
检测项目:含量测定
药典对比:修订,原15版药典仅需检测黄芩苷,20版药典更新检测黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素四种物质。
原2015版药典测定黄芩苷
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水-磷酸(47:53:0.2)为流动相;检测波长为280nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500。
对照品溶液的制备:取在60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含60μg的溶液,即得。
供试品溶液的制备:取本品中粉约0.3g,精密称定,加70%乙醇40ml,加热回流3小时,放冷,滤过,滤液置100ml量瓶中,用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣,洗液滤入同一量瓶中,加70%乙醇至刻度,摇匀。精密量取1ml,置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
现2020版药典测定黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素
【
溶液配制】
对照品溶液的制备:
取黄芩苷对照品、汉黄芩苷对照品、黄芩素对照品、汉黄芩素对照品适量,精密称定,加 70%甲醇制成每 1ml 含黄芩苷 300 µg、汉黄芩苷 80 µg、黄芩素 50 µg、汉黄芩素 20 µg 的混合溶液,即得。
供试品溶液的制备:
取本品粉末(过四号筛)约 0.1 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入 70%甲醇 50 ml,密塞,称定重量,超声处理(功率 400W,频率 100kHz)15 分钟,放冷,再称定重量,用 70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 µl,注入液相色谱仪,测定,即得。
1.3 色谱条件
色谱柱:InertSustain C18 5µm 250 × 4.6mm (P/N:5020-07346)
流动相:以乙腈为流动相A,0.1%磷酸为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱
时间(min) |
流动相A(%) |
流动相B(%) |
0~10 |
22→25 |
78→75 |
10~15 |
25 |
75 |
15~25 |
25→32 |
75→68 |
25~30 |
32→40 |
68→60 |
30~35 |
40 |
60 |
35~40 |
40→50 |
60→50 |
40~45 |
50→95 |
50→5 |
45~50 |
95 |
5 |
流速:1 ml/min
柱温:25℃
检测波长:276 nm
进样量:5 µl
柱压:107 bar
仪器型号:Thermo Ultimate 3000
检测器:DAD
2. 实验结果与讨论
对照品图谱:
序号 |
名称 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
1 |
黄芩苷 |
16.510 |
92.557 |
318.382 |
20612 |
1.03 |
2 |
汉黄芩苷 |
27.083 |
38.585 |
172.193 |
91904 |
1.01 |
3 |
黄芩素 |
34.263 |
29.918 |
162.784 |
220530 |
1.02 |
4 |
汉黄芩素 |
43.690 |
14.778 |
110.101 |
667023 |
0.99 |
供试品图谱:
序号 |
名称 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
分离度 |
2 |
黄芩苷 |
16.533 |
144.008 |
198.004 |
20680 |
1.06 |
2.17 |
3 |
汉黄芩苷 |
27.083 |
32.312 |
142.914 |
93131 |
1.06 |
/ |
5 |
黄芩素 |
34.260 |
24.048 |
130.082 |
223482 |
1.03 |
2.86 |
6 |
汉黄芩素 |
43.687 |
8.300 |
62.434 |
1098378 |
0.97 |
2.74 |
重现性:
3. 结论
黄芩按照新2020版含量检测方法检测,供试品黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素理论塔板数分别为20680、93131、223482、1098378,且5次重复实验理论塔板数及保留时间没有下降,故Inertsustain C18适合用于2020版药典黄芩检测项下黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的含量分析。
说明 :本次实验按照公示稿要求进行,无改动。