1. 实验分析
1.1 实验仪器及耗材
■色谱柱：Inertsil ODS-3 5µm 250 × 4.6mm（P/N: 5020-01732）
■GL Filter针式过滤器（GL0604 25mm x 0.22μm Nylon）
■GL Vial样品瓶（GL0008 2mL透明瓶带刻度+GL0143红膜白胶垫片）
■MPA-200电动移液枪（1065-43503）
1.2 新旧药典对比
检测项目：酚酸类-含量测定
药典对比：新增
【
溶液配制】
对照品溶液的制备 取绿原酸对照品、3,5-二-O-咖啡酰基奎宁酸对照品和4,5-二-O-咖啡酰基奎宁酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加75%甲醇制成每1 ml含0.28mg、0.15mg、44μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品粉末（过四号筛）约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇50 ml，称定重量，超声处理（功率500W，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 2μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
【系统适用性要求】理论板数按绿原酸峰计算应不低于10000。
1.3 色谱条件
色谱柱：Inertsil ODS-3 5µm 250 × 4.6mm（P/N: 5020-01732）
流动相：以乙腈为流动相 A，0.1 %磷酸溶液为流动相 B。
按下表中的规定进行梯度洗脱：
|
时间(分钟) |
流动相A(%) |
流动性B(%) |
|
0 |
14 |
86 |
|
8 |
19 |
81 |
|
14 |
19 |
81 |
|
34 |
31 |
69 |
|
35 |
90 |
10 |
|
40 |
90 |
10 |
流速：0.7ml/min
柱温：25℃
检测波长：327nm
进样量：2µl
柱压：103bar
仪器型号：Thermo Ultimate 3000
检测器：DAD
2. 实验结果与讨论
对照品图谱：
|
序号 |
名称 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
|
1 |
绿原酸 |
11.870 |
35.358 |
204.592 |
30879 |
1.05 |
|
2 |
3,5-二-O-咖啡酰基奎宁酸 |
32.200 |
28.575 |
118.906 |
118729 |
1.07 |
|
3 |
4,5-二-O-咖啡酰基奎宁酸 |
34.020 |
5.906 |
25.053 |
144993 |
1.18 |
供试品图谱：
|
序号 |
名称 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
|
1 |
绿原酸 |
11.853 |
45.164 |
270.124 |
31701 |
1.05 |
|
2 |
3,5-二-O-咖啡酰基奎宁酸 |
32.177 |
27.400 |
116.136 |
118026 |
1.05 |
|
3 |
4,5-二-O-咖啡酰基奎宁酸 |
33.993 |
4.141 |
17.852 |
145458 |
1.10 |
数据重现性：
以绿原酸计
|
进样针数 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
分离度 |
|
1 |
11.853 |
45.024 |
267.892 |
31389 |
1.04 |
64.43 |
|
2 |
11.860 |
45.173 |
268.768 |
31223 |
1.04 |
63.34 |
|
3 |
11.853 |
45.164 |
270.124 |
31701 |
1.05 |
63.42 |
|
4 |
11.850 |
45.117 |
269.310 |
31409 |
1.05 |
63.37 |
|
5 |
11.850 |
45.186 |
268.864 |
31325 |
1.04 |
63.47 |
以3,5-二-O-咖啡酰基奎宁酸计
|
进样针数 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
分离度 |
|
1 |
32.173 |
27.274 |
116.117 |
118975 |
1.06 |
4.97 |
|
2 |
32.173 |
27.390 |
116.583 |
119077 |
1.05 |
4.98 |
|
3 |
32.177 |
27.400 |
116.136 |
118026 |
1.05 |
4.97 |
|
4 |
32.177 |
27.393 |
116.403 |
118405 |
1.05 |
4.98 |
|
5 |
32.170 |
27.448 |
116.060 |
119335 |
1.06 |
4.98 |
以4,5-二-O-咖啡酰基奎宁酸计
|
进样针数 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
分离度 |
|
1 |
33.993 |
4.102 |
17.433 |
142998 |
1.12 |
- |
|
2 |
33.993 |
4.133 |
17.712 |
144622 |
1.12 |
- |
|
3 |
33.993 |
4.141 |
17.852 |
145458 |
1.10 |
- |
|
4 |
33.993 |
4.163 |
17.976 |
146089 |
1.10 |
- |
|
5 |
33.987 |
4.180 |
18.020 |
145530 |
1.10 |
- |
说明：本实验按照药典方法进行检测，没有改动。
3. 特征图谱
【色谱条件】
色谱条件与系统适用性试验除检测波长为240nm外，其他同【含量测定】酚酸类。
【溶液配制】
参照物溶液的制备 取绿原酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含0.40 mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备 同【含量测定】酚酸类。
供试品特征图谱中应呈现7个特征峰，与参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，应在规定值的±10%之内，保留时间规定值为：0.91（峰1）、1.00[峰2（S）]、1.17（峰3）、1.38（峰4）、2.43（峰5）、 2.81（峰6）、2.93（峰7）。
【分析结果】
特征图谱：
7个特征峰 峰2(S)：绿原酸；峰3：当药苷；峰4：断氧化马钱子苷；峰5：（Z）-二聚断马钱苷烯醛；峰6：3,5-双咖啡酰奎宁酸；峰7：4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸
|
序号 |
名称 |
t/min |
相对RT |
峰面积 |
峰高 |
塔板数 |
拖尾 |
|
1 |
1 |
10.573 |
0.89 |
11.611 |
59.608 |
18876 |
0.92 |
|
2（S） |
绿原酸 |
11.857 |
1.00 |
25.405 |
151.742 |
31616 |
1.03 |
|
3 |
当药苷 |
13.657 |
1.15 |
0.872 |
5.280 |
42782 |
1.03 |
|
4 |
断氧化马钱子苷 |
15.733 |
1.33 |
4.119 |
21.730 |
42694 |
1.04 |
|
5 |
（Z）-二聚断马钱苷烯醛 |
28.373 |
2.39 |
2.350 |
11.173 |
121504 |
0.86 |
|
6 |
3,5-二-O-咖啡酰基奎宁酸 |
32.173 |
2.71 |
14.925 |
63.325 |
118153 |
1.06 |
|
7 |
4,5-二-O-咖啡酰基奎宁酸 |
33.993 |
2.87 |
2.160 |
9.753 |
151143 |
1.06 |
说明：本实验完全按照药典标准规定进行，无改动。
4. 结论
按照新2020版药典要求，对其中物质含量进行测定，各物质分离度良好，以绿原酸计，其理论塔板数超过31000，且5次实验重复性良好。测试其特征图谱，各物质的相对保留时间满足药典要求。故Inertsil ODS-3 5µm 250 × 4.6mm（P/N: 5020-01732）满足2020版药典对金银花的分析要求。
