1. 实验分析
1.1 实验仪器及耗材
■ 色谱柱:InertSustainSwift C18 5µm 250 × 4.6mm(P/N:5020-88027)
■ GL Filter针式过滤器(GL0604 25mm x 0.22μm Nylon)
■ GL Vial样品瓶(GL0008 2mL透明瓶 带刻度+GL0143 红膜白胶垫片)
■ MPA-200 电动移液枪(1065-43503)
1.2 新旧药典对比
检测项目:氧化苦参碱-含量测定。
药典对比:修订对照品及供试品配置方法;修订液相色谱分析流动相条件,及理论塔板数要求。
【
溶液配制】
对照品溶液的制备 取苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品适量,精密称定,加乙醇分别制成每1mL含苦参碱50µg、氧化苦参碱0.15mg的溶液,即得。
供试品溶液的制备 取本品粉末(过三号筛)约0.3g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加浓氨试液0.4mL,精密加入三氯甲烷25mL,密塞,称定重量,超声处理(功率250W,率33kHz)40分钟,放冷,再称定重量,用三氯甲烷补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液10mL,回收溶剂至干,残渣加无水乙醇适量使溶解,转移至10mL量瓶中,加无水乙醇至刻度,摇匀,即得。
【系统适用性要求】理论板数按氧化苦参碱峰计算应不低于4000。
【
色谱条件】
色谱柱:InertSustainSwift C18 5µm 250 × 4.6mm(P/N:5020-88027)
流动相A:乙腈-[0.01mol/L乙酸铵溶液(浓氨试液调pH8.1)](3:2)
流动相B:0.01mol/L乙酸铵溶液(浓氨试液调pH8.1)
按下表要求进行梯度洗脱
时间(分钟) |
流动相A(%) |
流动相B(%) |
0⁓20 |
10→30 |
90→70 |
20⁓40 |
30→35 |
70→65 |
40⁓50 |
35→60 |
65→40 |
流速:1mL/min
柱温:25℃
检测波长:225nm
进样量:5µL
柱压:141bar
仪器型号:Thermo Ultimate 3000
检测器:DAD
2. 色谱结果与讨论
对照品图谱:
序号 |
名称 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
1 |
氧化苦参碱 |
12.163 |
3.927 |
20.487 |
26950 |
0.93 |
2 |
苦参碱 |
33.300 |
1.255 |
4.340 |
83308 |
1.03 |
供试品图谱:
序号 |
名称 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
分离度 |
1 |
氧化苦参碱 |
12.157 |
5.347 |
28.031 |
26480 |
0.93 |
- |
2 |
苦参碱 |
33.363 |
0.438 |
1.543 |
98824 |
1.03 |
1.72 |
重现性:
氧化苦参碱
进样针数 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
1 |
12.130 |
5.349 |
27.432 |
25202 |
0.92 |
2 |
12.143 |
5.357 |
27.638 |
25624 |
0.92 |
3 |
12.150 |
5.323 |
27.977 |
26481 |
0.94 |
4 |
12.157 |
5.347 |
28.031 |
26480 |
0.93 |
5 |
12.153 |
5.335 |
28.112 |
26776 |
0.94 |
苦参碱
进样针数 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
1 |
33.430 |
0.427 |
1.510 |
90214 |
0.92 |
2 |
33.390 |
0.440 |
1.572 |
91910 |
1.00 |
3 |
33.367 |
0.443 |
1.552 |
93293 |
1.00 |
4 |
33.363 |
0.438 |
1.543 |
98824 |
1.03 |
5 |
33.320 |
0.442 |
1.555 |
97170 |
1.03 |
说明:实验分析条件的流动相梯度程序稍有修改,以使得苦参碱与其相邻杂峰的分离度大于1.5。
3. 结论
按照2020版药典要求,适当调整流动相条件,使用InertSustainSwift C18 5µm 250×4.6mm(P/N:5020-88027)液相柱分析苦参中氧化苦参碱和苦参碱。以氧化苦参碱计,其理论塔板数远高于药典要求,且氧化苦参碱和苦参碱与其相邻杂质分离良好。故InertSustainSwift C18 5µm 250×4.6mm(P/N:5020-88027)适合用于2020版药典对苦参的分析要求。