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新的应用

2020版药典一部修订应用例——苦参

发布时间:2020-09-04 17:12 发布人:admin
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1. 实验分析
1.1 实验仪器及耗材
■ 色谱柱:InertSustainSwift C18 5µm 250 × 4.6mm(P/N:5020-88027)
■ GL Filter针式过滤器(GL0604 25mm x 0.22μm Nylon)
■ GL Vial样品瓶(GL0008 2mL透明瓶 带刻度+GL0143 红膜白胶垫片)
■ MPA-200 电动移液枪(1065-43503)

1.2 新旧药典对比
检测项目:氧化苦参碱-含量测定。
药典对比:修订对照品及供试品配置方法;修订液相色谱分析流动相条件,及理论塔板数要求。
溶液配制
对照品溶液的制备 取苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品适量,精密称定,加乙醇分别制成每1mL含苦参碱50µg、氧化苦参碱0.15mg的溶液,即得。
供试品溶液的制备 取本品粉末(过三号筛)约0.3g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加浓氨试液0.4mL,精密加入三氯甲烷25mL,密塞,称定重量,超声处理(功率250W,率33kHz)40分钟,放冷,再称定重量,用三氯甲烷补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液10mL,回收溶剂至干,残渣加无水乙醇适量使溶解,转移至10mL量瓶中,加无水乙醇至刻度,摇匀,即得。
【系统适用性要求】理论板数按氧化苦参碱峰计算应不低于4000。
色谱条件
色谱柱InertSustainSwift C18 5µm 250 × 4.6mmP/N:5020-88027
流动相A:乙腈-[0.01mol/L乙酸铵溶液(浓氨试液调pH8.1)](3:2)
流动相B:0.01mol/L乙酸铵溶液(浓氨试液调pH8.1)
按下表要求进行梯度洗脱
时间(分钟) 流动相A(%) 流动相B(%)
0⁓20 10→30 90→70
20⁓40 30→35 70→65
40⁓50 35→60 65→40
流速:1mL/min
柱温:25℃
检测波长:225nm
进样量:5µL
柱压:141bar
仪器型号:Thermo Ultimate 3000
检测器:DAD

2. 色谱结果与讨论
对照品图谱:

序号 名称 t/min 峰面积 峰高 理论塔板数 拖尾因子
1 氧化苦参碱 12.163 3.927 20.487 26950 0.93
2 苦参碱 33.300 1.255 4.340 83308 1.03
 
供试品图谱:

序号 名称 t/min 峰面积 峰高 理论塔板数 拖尾因子 分离度
1 氧化苦参碱 12.157 5.347 28.031 26480 0.93 -
2 苦参碱 33.363 0.438 1.543 98824 1.03 1.72
重现性:

氧化苦参碱
进样针数 t/min 峰面积 峰高 理论塔板数 拖尾因子
1 12.130 5.349 27.432 25202 0.92
2 12.143 5.357 27.638 25624 0.92
3 12.150 5.323 27.977 26481 0.94
4 12.157 5.347 28.031 26480 0.93
5 12.153 5.335 28.112 26776 0.94








苦参碱
进样针数 t/min 峰面积 峰高 理论塔板数 拖尾因子
1 33.430 0.427 1.510 90214 0.92
2 33.390 0.440 1.572 91910 1.00
3 33.367 0.443 1.552 93293 1.00
4 33.363 0.438 1.543 98824 1.03
5 33.320 0.442 1.555 97170 1.03








说明:实验分析条件的流动相梯度程序稍有修改,以使得苦参碱与其相邻杂峰的分离度大于1.5。

3. 结论
按照2020版药典要求,适当调整流动相条件,使用InertSustainSwift C18 5µm 250×4.6mm(P/N:5020-88027)液相柱分析苦参中氧化苦参碱和苦参碱。以氧化苦参碱计,其理论塔板数远高于药典要求,且氧化苦参碱和苦参碱与其相邻杂质分离良好。故InertSustainSwift C18 5µm 250×4.6mm(P/N:5020-88027)适合用于2020版药典对苦参的分析要求。

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