1. 实验分析
1.1 实验仪器及耗材
■ 色谱柱:InertSustain C18 5µm 250 × 4.6mm(P/N:5020-07346)
■ GL Filter针式过滤器(GL0604 25mm x 0.22μm Nylon)
■ GL Vial样品瓶(GL0008 2mL透明瓶带刻度+GL0143红膜白胶垫片)
■ MPA-200电动移液枪(1065-43503)
1.2 新旧药典对比
检测项目:野黄芩苷-含量测定
药典对比:修订鉴别、检查等方法要求,对野黄芩苷测定的方法及要求没有变化。
【
溶液配制】
对照品溶液的制备 取野黄芩苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1mL含80μg的溶液,即得。
供试品溶液的制备 取本品粉末(过三号筛)约1g,精密称定,置索氏提取器中,加石油醚(60~90℃)提取至无色,弃去醚液,药渣挥去石油醚,加甲醇继续提取至无色,转移至100mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,精密量取25mL,回收溶剂至干,残渣用20%甲醇溶解,转移至25mL量瓶中,并稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
【系统适用性要求】理论板数按野黄芩苷峰计算应不低于1500。
1.3 色谱条件
色谱柱:InertSustain C18 5µm 250 × 4.6mm (P/N:5020-07346)
流动相:甲醇-水:醋酸(61:4) (33:67)
流速:1mL/min
柱温:25 ℃
检测波长:335nm
进样量:10µL
柱压:166bar
仪器型号:Thermo Ultimate 3000
检测器:DAD
2. 实验结果与讨论
对照品图谱:
序号 |
名称 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
1 |
野黄芩苷 |
23.920 |
56.398 |
69.870 |
5622 |
1.10 |
供试品图谱:
序号 |
名称 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
1 |
野黄芩苷 |
24.007 |
1.356 |
1.603 |
5213 |
0.98 |
数据重现性:
进样针数 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
1 |
23.993 |
1.350 |
1.608 |
4990 |
0.96 |
2 |
24.050 |
1.342 |
1.611 |
4964 |
0.98 |
3 |
24.090 |
1.321 |
1.594 |
4603 |
0.95 |
4 |
24.007 |
1.356 |
1.603 |
5213 |
0.98 |
5 |
24.000 |
1.351 |
1.616 |
4973 |
0.95 |
说明:本实验在药典允许范围内对流动相比例进行了调整,以满足分离度要求。
3. 结论
按照2020版药典要求,使用InertSustain C18 5µm 250 × 4.6mm(P/N:5020-07346),在药典允许范围内对流动相比例进行适当调整,对其中物质含量进行测定,目标物与杂质分离度良好。以野黄芩苷计,其理论塔板数满足药典要求。5次实验重复性良好。故InertSustain C18 5µm 250 × 4.6mm(P/N:5020-07346)满足2020版药典对半枝莲的分析要求。