1. 实验分析
1.1 实验仪器及耗材
■ 色谱柱:InertSustainSwift C18 5µm 250 × 4.6mm(P/N:5020-88027)
■ GL Filter针式过滤器(GL0604 25mm x 0.22μm Nylon)
■ GL Vial样品瓶(GL0008 2mL透明瓶 带刻度+GL0143 红膜白胶垫片)
■ MPA-200 电动移液枪(1065-43503)
1.2 新旧药典对比
检测项目:穿心莲内酯、新穿心莲内酯、14-去氧穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯-含量测定。
药典对比:修订鉴别方法;修订对照品、供试品配置方法;修订含量检测的液相色谱分析条件,及理论塔板数要求;增加其它相关物质的相对保留时间要求,及按照校正因子计算其它相关物质的含量。
【
溶液配制】
对照品溶液的制备 取穿心莲内酯对照品适量,精密称定,加甲醇制成每lmL含0.3mg的溶液,即得。
供试品溶液的制备 取本品粉末(过四号筛)约0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入40%甲醇25mL,密塞,称定重量,超声处理(功率250 W,频率40 kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用40%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
【系统适用性要求】
理论板数按穿心莲内酯峰计算应不低于8000。以穿心莲内酯对照品为参照,以其相应的峰为S峰,计算新穿心莲内酯、14-去氧穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的相对保留时间,其相对保留时间应在规定值(见下表)的±5%范围之内。
【
色谱条件】
色谱柱:InertSustainSwift C18 5µm 250 × 4.6mm(P/N:5020-88027)
以乙腈为流动相A,水流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱
流速:1mL/min
柱温:40℃
检测波长:205nm
进样量:5µL
柱压:155bar
仪器型号:Thermo Ultimate 3000
检测器:DAD
2. 色谱结果与讨论
对照品图谱:
序号 |
名称 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
1 |
穿心莲内酯 |
22.247 |
37.567 |
140.982 |
43945 |
1.05 |
供试品图谱:
序号 |
名称 |
t/min |
相对保留时间 |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
分离度 |
1 |
穿心莲内酯 |
22.420 |
1.00 |
13.747 |
50.580 |
44914 |
1.02 |
50.10 |
2 |
新穿心莲内酯 |
44.463 |
1.98 |
4.278 |
14.862 |
151629 |
1.03 |
7.36 |
3 |
14-去穿心莲内酯 |
48.167 |
2.15 |
4.013 |
11.775 |
122919 |
1.03 |
3.49 |
4 |
脱水穿心莲内酯 |
50.047 |
2.23 |
13.826 |
41.415 |
143086 |
1.04 |
- |
重现性:
穿心莲内酯
进样针数 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
分离度 |
1 |
22.420 |
13.747 |
50.580 |
44914 |
1.02 |
50.10 |
2 |
22.293 |
13.636 |
50.089 |
44010 |
1.01 |
49.39 |
3 |
22.280 |
13.739 |
50.752 |
44486 |
1.01 |
50.05 |
4 |
22.263 |
13.856 |
51.090 |
43839 |
1.01 |
49.74 |
5 |
22.260 |
13.987 |
51.455 |
44491 |
1.01 |
49.82 |
新穿心莲内酯
进样针数 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
分离度 |
1 |
44.463 |
4.278 |
14.862 |
151629 |
1.03 |
7.36 |
2 |
44.347 |
4.218 |
14.539 |
143715 |
1.04 |
7.39 |
3 |
44.317 |
4.290 |
14.853 |
149728 |
1.04 |
7.38 |
4 |
44.297 |
4.319 |
14.984 |
147942 |
1.05 |
7.30 |
5 |
44.283 |
4.354 |
15.063 |
146965 |
1.05 |
7.39 |
14-去穿心莲内酯
进样针数 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
分离度 |
1 |
48.167 |
4.013 |
11.775 |
122919 |
1.03 |
3.49 |
2 |
48.070 |
3.957 |
11.527 |
127002 |
1.04 |
3.51 |
3 |
48.023 |
4.017 |
11.723 |
121079 |
1.02 |
3.48 |
4 |
48.007 |
4.073 |
11.994 |
117299 |
1.02 |
3.46 |
5 |
48.062 |
4.158 |
11.787 |
123590 |
1.05 |
3.52 |
脱水穿心莲内酯
进样针数 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
分离度 |
1 |
50.047 |
13.826 |
41.415 |
143086 |
1.04 |
- |
2 |
49.960 |
13.752 |
40.816 |
138931 |
1.03 |
- |
3 |
49.933 |
13.843 |
41.236 |
139780 |
1.03 |
- |
4 |
49.913 |
13.873 |
41.430 |
140473 |
1.03 |
- |
5 |
49.907 |
14.033 |
41.842 |
139893 |
1.03 |
- |
说明:本实验按照药典方法进行检测,没有改动。
3. 结论
按照2020版药典要求,分析穿心莲中穿心莲内酯的含量。以穿心莲内酯计,其理论塔板数约4.4万,远高于药典要求的8000,相关物质新穿心莲内酯、14-去氧穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的相对保留时间满足药典要求。且5次重复实验理论塔板数及相对保留时间重复性良好。故InertSustainSwift C18 5µm 250×4.6mm(P/N:5020-88027)适合用于2020版药典对穿心莲的分析要求。