黄芩
1. 实验分析
1.1 实验仪器及耗材
■ 色谱柱：InertSustain C18 5µm 250 × 4.6mm （P/N:5020-07346）
■ GL Filter针式过滤器（GL0604 25mm x 0.22μm Nylon）
■ GL Vial样品瓶（GL0008 2mL透明瓶 带刻度+GL0143 红膜白胶垫片）
■ MPA-200 电动移液枪（1065-43503）

1.2 新旧药典对比
检测项目：含量测定
药典对比：修订，原15版药典仅需检测黄芩苷，20版药典更新检测黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素四种物质。
原2015版药典测定黄芩苷
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-磷酸（47：53：0.2）为流动相；检测波长为280nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500。
对照品溶液的制备：取在60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品中粉约0.3g，精密称定，加70%乙醇40ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀。精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
现2020版药典测定黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素
【溶液配制】
对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品、汉黄芩苷对照品、黄芩素对照品、汉黄芩素对照品适量，精密称定，加 70%甲醇制成每 1ml 含黄芩苷 300 µg、汉黄芩苷 80 µg、黄芩素 50 µg、汉黄芩素 20 µg 的混合溶液，即得。 
供试品溶液的制备：取本品粉末（过四号筛）约 0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 70%甲醇 50 ml，密塞，称定重量，超声处理（功率 400W，频率 100kHz）15 分钟，放冷，再称定重量，用 70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 µl，注入液相色谱仪，测定，即得。
 
1.3 色谱条件
色谱柱：InertSustain C18 5µm 250 × 4.6mm （P/N:5020-07346）
流动相：以乙腈为流动相A，0.1%磷酸为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱

时间(min)	流动相A(%)	流动相B(%)
0~10	22→25	78→75
10~15	25	75
15~25	25→32	75→68
25~30	32→40	68→60
30~35	40	60
35~40	40→50	60→50
40~45	50→95	50→5
45~50	95	5

流速：1 ml/min
柱温：25℃
检测波长：276 nm
进样量：5 µl
柱压：107 bar
仪器型号：Thermo Ultimate 3000
检测器：DAD

2. 实验结果与讨论
对照品图谱：

序号	名称	t/min	峰面积	峰高	理论塔板数	拖尾因子
1	黄芩苷	16.510	92.557	318.382	20612	1.03
2	汉黄芩苷	27.083	38.585	172.193	91904	1.01
3	黄芩素	34.263	29.918	162.784	220530	1.02
4	汉黄芩素	43.690	14.778	110.101	667023	0.99

 
供试品图谱：

序号	名称	t/min	峰面积	峰高	理论塔板数	拖尾因子	分离度
2	黄芩苷	16.533	144.008	198.004	20680	1.06	2.17
3	汉黄芩苷	27.083	32.312	142.914	93131	1.06	/
5	黄芩素	34.260	24.048	130.082	223482	1.03	2.86
6	汉黄芩素	43.687	8.300	62.434	1098378	0.97	2.74

重现性：

 



3. 结论
黄芩按照新2020版含量检测方法检测，供试品黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素理论塔板数分别为20680、93131、223482、1098378，且5次重复实验理论塔板数及保留时间没有下降，故Inertsustain C18适合用于2020版药典黄芩检测项下黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的含量分析。

说明 ：本次实验按照公示稿要求进行，无改动。