1. 实验分析
1.1 实验仪器及耗材
■ 色谱柱：InertSustain C18 5µm 250 × 4.6mm （P/N:5020-07346）
■ GL Filter针式过滤器（GL0604 25mm x 0.22μm Nylon）
■ GL Vial样品瓶（GL0008 2mL透明瓶 带刻度+GL0143 红膜白胶垫片）
■ MPA-200 电动移液枪（1065-43503）
1.2 新旧药典对比
药典对比：新增，原15版药典未有含量测定方法，20版药典新增含量测定。
【
溶液配制】
对照品溶液的制备 取人参皂苷 Ro 对照品和竹节参皂苷 IVa 对照 品适量，精密称定，分别加 60%甲醇制成每 1 ml 含 1.0 mg 的溶液，即 得。
供试品溶液的制备 取本品粉末（过二号筛）约 0.2 g ，精密称定，（功率 500 W，频率 28kHz）40 分钟，放冷，再称定重量，用 60%甲 醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
【
系统适用性要求】理论板数按人参皂苷Ro峰计算应不低于10000。
【
色谱条件】
色谱柱：InertSustain C18 5µm 250 × 4.6mm （P/N:5020-07346）
流动相：以乙腈为流动相 A，以 0.15%磷酸溶液为流动相 B，按下表中的规定进 行梯度洗脱；
|
时间（分钟） |
流动相A% |
流动相B% |
|
0～3 |
25 |
75 |
|
3～11 |
25→33 |
75→67 |
|
11～35 |
33 |
67 |
|
35～40 |
33→37 |
67→63 |
|
40～50 |
37 |
63 |
流速：1ml/min
柱温：40℃
检测波长：203nm
进样量：20µl
柱压：85 bar
仪器型号：Ultimate 3000
检测器：DAD
2.
色谱结果与讨论
对照品图谱：
|
序号 |
名称 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
|
1 |
人参皂苷Ro |
25.960 |
108.663 |
238.241 |
20263 |
0.95 |
|
2 |
竹节参皂苷IVa |
39.993 |
103.718 |
169.670 |
26808 |
0.90 |
供试品图谱：
|
序号 |
名称 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
分离度 |
|
1 |
人参皂苷Ro |
25.890 |
63.984 |
135.057 |
20351 |
0.97 |
15.93 |
|
2 |
竹节参皂苷IVa |
39.807 |
14.629 |
22.834 |
24287 |
1.04 |
|
重现性：
人参皂苷Ro
|
进样针数 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
分离度 |
|
1 |
25.920 |
63.843 |
134.742 |
20359 |
0.96 |
16.03 |
|
2 |
25.890 |
63.984 |
135.057 |
20351 |
0.97 |
15.93 |
|
3 |
25.887 |
63.968 |
134.025 |
19980 |
0.97 |
15.86 |
|
4 |
25.883 |
63.995 |
133.748 |
19875 |
0.98 |
15.84 |
|
5 |
25.913 |
64.047 |
134.854 |
20346 |
0.97 |
15.92 |
竹节参皂苷Iva
|
进样针数 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
分离度 |
|
1 |
39.840 |
14.580 |
22.988 |
24867 |
1.04 |
n.a. |
|
2 |
39.807 |
14.629 |
22.834 |
24287 |
1.04 |
n.a. |
|
3 |
39.790 |
14.611 |
22.897 |
24292 |
1.03 |
n.a. |
|
4 |
39.800 |
14.635 |
22.561 |
23704 |
1.04 |
n.a. |
|
5 |
39.827 |
14.632 |
22.962 |
24317 |
1.04 |
n.a. |
说明：本实验按照药典方法进行检测，没有改动。
3. 结论
竹节参供试品按照2020版含量检测方法检测，以人参皂苷 Ro 峰计的理论塔板数约20000，远高于药典的要求10000，且5次重复实验理论塔板数及保留时间重复性良好。故InertSustain C18 5µm 250 × 4.6mm （P/N:5020-07346）适合用于2020版药典竹节参中人参皂苷 Ro 对照品和竹节参皂苷 Iva的含量分析。
