1. 实验分析
1.1 实验仪器及耗材
■ 色谱柱：InertSustain C18 5µm 250 × 4.6mm （P/N:5020-07346）
■ GL Filter针式过滤器（GL0604 25mm x 0.22μm Nylon）
■ GL Vial样品瓶（GL0008 2mL透明瓶 带刻度+GL0143 红膜白胶垫片）
■ MPA-200 电动移液枪（1065-43503）
1.2 新旧药典对比
检测项目：含量测定-总黄酮醇苷
药典对比：
修订检测方法
2015药典以乙腈：水=30：70等度洗脱，理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500；新药典更新为梯度洗脱方式，详见如下色谱条件，理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于8000。
新增供试品检测要求
新版药典要求相对保留时间及校正因子：以淫羊藿苷对照品为参照，以其相应的峰为S峰，计算朝藿定A、朝藿定B、朝藿定 C 峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5%范围之内。
相对保留时间及校正因子见下表。
|
待测成分（峰） |
相对保留时间 |
校正因子 |
|
朝藿定A |
0.73 |
1.35 |
|
朝藿定B |
0.81 |
1.28 |
|
朝藿定C |
0.90 |
1.22 |
|
淫羊藿苷（S） |
1.00 |
1.00 |
【
溶液配制】
对照品溶液的制备 取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 1 ml 含40μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品叶片，粉碎过三号筛，取0.2g,精密称定，置具塞锥形中精密加稀乙醇20ml，称定重量，超声处理（功率：400W，频率50kHz）60分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。
【
系统适用性要求】理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于8000。
【
色谱条件】
色谱柱：InertSustain C18 5µm 250 × 4.6mm （P/N:5020-07346）
流动相：以乙腈为流动相 A，水为流动相 B，按下表中的规定 进行梯度洗脱
|
时间（分钟） |
流动相A% |
流动相B% |
|
0～30 |
24→26 |
76→74 |
|
30～31 |
26→45 |
74→55 |
|
31～45 |
45→47 |
55→53 |
流速：1ml/min
柱温：30℃
检测波长：270nm
进样量：10µl
柱压：104 bar
仪器型号：Thermo Ultimate 3000
检测器：DAD
2. 实验结果与讨论
对照品图谱：
|
序号 |
名称 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
|
1 |
淫羊藿苷 |
30.523 |
11.822 |
20.327 |
17438 |
1.06 |
供试品图谱：
|
序号 |
名称 |
t/min |
相对保留时间 |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
分离度 |
|
1 |
朝藿定A |
22.407 |
22.321 |
3.050 |
6.144 |
12982 |
1.07 |
3.02 |
|
2 |
朝藿定B |
24.847 |
24.767 |
3.647 |
7.020 |
14381 |
1.05 |
2.93 |
|
3 |
朝藿定C |
27.383 |
27.519 |
2.815 |
4.864 |
14745 |
0.98 |
3.45 |
|
4 |
淫羊藿苷 |
30.577 |
30.577 |
9.526 |
16.056 |
16674 |
1.08 |
|
重现性：
|
进样针数 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
|
1 |
30.537 |
9.529 |
15.729 |
16007 |
1.08 |
|
2 |
30.527 |
9.513 |
15.673 |
15852 |
1.08 |
|
3 |
30.530 |
9.499 |
15.467 |
15560 |
1.08 |
|
4 |
30.500 |
9.508 |
15.456 |
15359 |
1.08 |
|
5 |
30.497 |
9.545 |
15.461 |
15320 |
1.08 |
说明：此试验按照药典方法进行检测，没有改动。
3. 结论
淫羊藿苷按照新2020版含量检测方法检测，供试品理论塔板数可达1.5万以上，且5次重复实验数据良好；计算朝藿定A、朝藿定B、朝藿定 C 峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5%范围之内。故InertSustain C18 5µm 250 × 4.6mm（P/N:5020-07346）适合用于2020版药典淫羊藿的分析。
