地红霉素肠溶片有关物质
1.实验分析
1.1实验仪器及耗材
■色谱柱:Inertsil ODS-3 5μm 250×4.6mm(PN:5020-01732)
■GL Filter针式过滤器(GL0604 25mm x 0.22μm Nylon)
■GL Vial样品瓶(GL0008 2mL透明瓶带刻度+GL0143 红膜白胶垫片)
■MPA-200 电动移液枪(1065-43503)
1.2新旧药典对比
检测项目:有关物质测定
药典对比:新增
【
溶液配制】
供试品溶液 本品10片,除去包衣,精密称定,研细 ,精密称取适量(约相当于地红霉素0.1g ),加乙腈-甲醇(70 : 30)溶解并定量稀释制成每1mL中约含地红霉素10mg的溶液 ,滤过,取续滤液。
对照溶液 取地红霉素对照品适量,精密称定,加乙腈-甲醇(70 : 30)溶解并定量稀释制成每1mL中约含0.1mg的溶液。
系统适用性溶液 取地红霉素对照品适量,加流动相溶解并稀释制成每1mL中约含2.5mg的溶液,室温放置至少24小时。
灵敏度溶液 精密量取对照品溶液1mL,置10mL量瓶中,用乙腈-甲醇(70 :30)稀释至刻度,摇匀。
测定法 精密量取供试品溶液和对照溶液20µL,分别注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。
【系统适用性要求】
系统适用性溶液色谱图中,地红霉素峰的保留时间约为15分钟,9-(S)-红霉胺峰的相对保留时间约为0.6,16S-地红霉素异构体峰的相对保留时间约为1.1;地红霉素峰与16S-地红霉素异构体峰间的分离度应大于2.0;地红霉素峰与其他各杂质峰间的分离度均应符合要求;灵敏度溶液色谱图中,主成分色谱峰峰高的信噪比应大于10。
1.3色谱条件
色谱柱:Inertsil ODS-3 5μm 250×4.6mm(PN:5020-01732)
流动相:磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾1.41g与磷酸氢二钾6.91g ,加 水1000mL使溶解)-乙腈-甲醇 (37 : 44 : 19)
柱温:25 ℃
检测波长:205nm
流速:1.2mL/min
进样量:20µL
柱压:110bar
仪器型号:Thermo Ultimate 3000
检测器:DAD
2.实验结果与讨论
灵敏度图谱:
序号 |
名称 |
t/min |
峰面积 |
信噪比 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
1 |
地红霉素 |
15.187 |
0.141 |
23.2 |
8082 |
1.12 |
对照溶液图谱:
序号 |
名称 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
1 |
地红霉素 |
15.140 |
1.603 |
3.758 |
7980 |
1.10 |
供试品图谱:
名称 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
9-(S)-红霉胺 |
9.400 |
0.419 |
0.927 |
1914 |
1.00 |
地红霉素 |
14.737 |
165.676 |
371.390 |
6974 |
1.74 |
16S-地红霉素 |
17.487 |
28.686 |
56.234 |
7472 |
1.35 |
系统适用性:
名称 |
t/min |
相对保留时间 |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
分离度 |
9-(S)-红霉胺 |
9.450 |
0.63 |
0.277 |
0.758 |
3580 |
1.08 |
8.60 |
地红霉素 |
15.007 |
1.0 |
31.439 |
75.608 |
8277 |
1.32 |
3.73 |
16S-地红霉素 |
17.683 |
1.17 |
6.525 |
13.344 |
8337 |
1.15 |
- |
数据重现性:
地红霉素:
进样针数 |
t/min |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
分离度 |
1 |
14.900 |
150.566 |
322.486 |
6520 |
1.72 |
1.76 |
2 |
14.887 |
148.725 |
318.521 |
6497 |
1.73 |
1.74 |
3 |
14.887 |
147.463 |
316.467 |
6534 |
1.72 |
1.75 |
4 |
14.883 |
146.758 |
316.708 |
6613 |
1.73 |
1.74 |
5 |
14.880 |
146.128 |
315.702 |
6622 |
1.73 |
1.76 |
3.结论
根据2020药典对地红霉素肠溶片有关物质的测试要求,调整方法流速为1.2mL/min,使用Inertsil ODS-3 5μm 250×4.6mm(PN:5020-01732)进行分析,地红霉素峰的保留时间约为15分钟,灵敏度测试的信噪比为23.2。9-(S)-红霉胺峰的相对保留时间为0.63,16S-地红霉素异构体峰的相对保留时间为1.17;地红霉素峰与16S-地红霉素异构体峰间的分离度为3.7,且与其他各杂质峰间的分离度均符合要求。5次数据重复性良好。故Inertsil ODS-3 5μm 250×4.6mm(PN:5020-01732)适合用于2020版药典对地红霉素肠溶片有关物质的分析。